न्यूक्लिक एसिड संश्लेषण ठोस चरण सियालिक एमाइड ट्राइग्लिसराइड विधि प्रयोग गरी गरिन्छ, जसमा DNA को 3′ छेउ ठोस चरण सब्सट्रेटमा स्थिर हुन्छ र इच्छित DNA खण्ड संश्लेषित नभएसम्म 3′ देखि 5′ दिशामा न्यूक्लियोटाइडहरू थपिन्छन्। ।यो DNA पोलिमरेज को आवेदन द्वारा DNA संश्लेषण देखि फरक छ।
संश्लेषणको क्रममा पहिलो आधारको 3′ छेउ CPG मा स्थिर हुन्छ, अर्को आधारको 5′-OH लाई di-p-tolyl trityl DMT द्वारा सुरक्षित गरिन्छ, आधारमा रहेको एमिनो समूह बेन्जोइक एसिड र 3′ द्वारा सुरक्षित हुन्छ। -OH त्यसपछि एमिनो फास्फेट कम्पाउन्डसँग सक्रिय हुन्छ।1 आधारको 5 5′-OH को 1 आधार र अर्को आधारको 3′-OH ले एक फास्फाइट ट्राइग्लिसराइड बनाउँछ, जसलाई आयोडिनले फस्फेट ट्राइग्लिसराइडमा अक्सिडाइज गरिन्छ, दोस्रो आधार 5′-OH मा रहेको प्रोटेक्टेन्ट द्वारा हटाइन्छ। अर्को आधार थपेर डाइक्लोरोएसेटिक एसिड DM चक्रहरू थप्दै, र संश्लेषण पछि 5′-OH मा रहेको प्रोटेक्टेन्टलाई कमजोर एसिडले हटाइन्छ। टुक्रालाई केन्द्रित अमोनियम हाइड्रोक्साइडको साथ ठोस रालबाट विच्छेद गरिएको छ, प्रोटेक्टेन्टलाई आधारबाट हटाइन्छ। तातो अन्तर्गत केन्द्रित अमोनियम हाइड्रोक्साइडको साथ, अमोनियम हाइड्रोक्साइड हटाइन्छ, टुक्रा भ्याकुम सुकाइन्छ, र न्यूक्लिक एसिड तरल क्रोमेटोग्राफी वा PAGE द्वारा शुद्ध हुन्छ।
ओलिगो संश्लेषण को चरण
अवरुद्ध गर्दै
द5 अन्त DMT सुरक्षा समूह TCA समाधान थपेर हटाइएको छ।
सक्रियता
सक्रिय oligonucleotide monomer मध्यवर्ती गठन गर्न oligonucleotide monomer संग एक्टिभेटर मिश्रण।
युग्मन
5-टर्मिनल हाइड्रॉक्सिल समूहले सक्रिय ओलिगोन्यूक्लियोटाइड मध्यवर्तीसँग एक अस्थिर फस्फाइट ट्राइग्लिसराइड बन्ड बनाउनको लागि एन्टि-जेनेरेटिभ कन्डेन्सेसन प्रतिक्रियामा प्रतिक्रिया गर्दछ।
क्यापिङ
क्यापिङ एजेन्टको थपले अतिरिक्त हाइड्रोक्सिल समूहहरूसँग एसिटिलेशन क्यापिङ प्रतिक्रिया गर्दछ जुन संक्षेपण प्रतिक्रियामा संलग्न हुँदैन।
ओक्सीकरण
पानी युक्त आयोडिन घोलको थपले स्थिर फस्फोरिक एसिड ट्राइग्लिसराइड बन्धन बनाउन अक्सीकरणद्वारा अस्थिर फस्फाइट बन्डहरूसँग प्रतिक्रिया गर्दछ।
Cyanoethyl क्लीभेज
फस्फेट ट्राइग्लिसराइड बन्डबाट cyanoethyl समूह हटाउन DEA समाधानको थपको साथ संश्लेषण पछि न्यूक्लिक एसिड उत्पादन।
क्लीभ र डिप्रोटेक्शन
न्युक्लिक एसिड टुक्राहरूलाई ठोस चरण वाहकबाट एक केन्द्रित अमोनियम हाइड्रोक्साइड समाधान थपेर तोडिन्छ र त्यसपछि बेसहरूको हाइड्रोजन बन्डहरूबाट सुरक्षा समूहहरू हटाउन तताइन्छ।
पोस्ट समय: नोभेम्बर-21-2022